為什么PCR實驗室要分區隔離?

　　依據國家法規，在專業的PCR實驗(比如臨床PCR檢驗實驗室)室通常需要做到四區隔離(或至少是三區隔離)的要求。

　　一般常見的三區指的是：

　　1.試劑配制區：PCR反應系統配制區。

　　2.標本處理區:包括擴展模板的制備，也就是我們經常提取DNA的地方;3.PCR擴增和產品分析區域:PCR擴增區域，也是凝膠電泳分析擴增產品區域。

　　如果細分PCR擴展區和產品分析區，則為典型的四區隔離。四區隔離的主要目的是防止氣溶膠在各PCR區域之間流動。為了避免相互污染，可以為不同區域設置正負壓：

　　1.試劑準備區(一區):最干凈的區域，保持微正壓，防止外部空氣進入隔離污染源。此外，陰性模板應添加PCR管并覆蓋在該區域，嚴禁在該區域打開。儲存帶有DNA模板的離心管;

　　2.增加DNA模板(ⅱ區)：保持微負壓，確保內部空氣不泄漏，避免陽性模板的氣溶膠污染外部環境。

　　3.擴增及PCR產品分析區(三區)：保持微負壓，使內部空氣不泄漏，避免擴增產物的氣溶膠污染外部環境。

　　在進入PCR實驗室時，需要遵循一個方向進行操作不能逆向進行。

　　否則，可能會產生氣溶膠污染和假陽性結果!因此，在PCR實驗室投入使用之前，必須先通過國家授權的檢測機構進行檢測，取得PCR實驗室檢測合格報告，然后在正常使用前進行徹底消毒。

PCR實驗室污染怎么辦?

　　在生物實驗室中，污染總是不可能預防的，安靜的，虛假的陽性結果使無數的實驗室人員瘋狂和崩潰。如何避免實驗室污染是首要任務。大多數生物學實驗都是基于細胞、分子和蛋白質水平的微觀實驗。這些微樣本對外部環境的影響很敏感，環境中的雜質污染。試劑和儀器的交叉污染。產品氣溶膠污染等，將對實驗結果產生負面影響。

　　首先，我們需要了解哪些常見的污染源?

　　交叉污染樣本?試劑交叉污染?克隆顆粒污染?PCR擴張產品污染?氣溶膠污染。

　　如何防止PCR實驗室污染？

　　(一)實驗室分區合理。

　　實驗室各工作區的實驗用品，包括移液器，應專門使用。如果可能，PCR試劑應放置在配有紫外線燈的層流工作臺(如生物安全柜和超凈工作臺)中。PCR專業微量離心機應放置在工作臺內。一次性手套。每個范圍內的液體轉移器和其他必要物品。

　　(二)實驗操作正確。

　　①PCR試劑和模板的操作應嚴格按照要求進行，樣品應緩慢，盡量一次完成，避免多次吸煙，避免交叉污染或氣溶膠污染。在實驗過程中，手套應經常更換。進出不同區域或模板后，應及時更換手套。

　　②配備PCR試劑的微量離心管應在打開前進行瞬時離心(約10秒)，將管壁和管蓋上的液體拋到管底，以減少污染手套或添加樣品的機會。打開管道的動作要輕，防止管道中的液體濺出或形成氣溶膠，造成污染。

　　③同時進行多個PCR反應時，應制備主反應混合物，然后將其分裝到PCR反應管中。zui后，添加樣品核酸模板，以減少繁瑣的單次添加操作造成的污染。

　　(三)實驗儀器和試劑。

　　①實驗室配制的試劑，如去離子水、緩沖液等，在使用前應進行高壓滅菌或過濾滅菌。

　　②單獨包裝PCR試劑:所有PCR試劑均應單獨包裝，以減少重復取樣次數，并保存在-20℃。此外，PCR試劑。PCR反應液應與樣品和PCR產品分開保存，不得放在同一個冰箱或冰箱中。

　　③所有吸頭、反應管等應一次使用，使用前應進行高壓處理。如果條件允許，最好使用帶過濾器的槍頭。

　　④每個工作區域的移液器要有標識，要固定使用，不能交叉使用。

　　(四)實驗設計。

　　實驗設計應遵循實驗室內部質量控制的有關規定，至少在實驗中：

　　①設置目標DNA陽性對照反應。實驗前應在實驗室的其他位置進行目標序列的適當稀釋，以防止目標DNA的濃縮溶液被帶到實驗室進行PCR的特殊位置。

　　②設置PCR試劑陰性對照和目標DNA陰性對照。

　　實驗室的合理設計與建設是順利進行PCR實驗的基礎和保障，不合理的規劃設計給后期實驗的進行帶來很多麻煩，從源頭杜絕實驗的麻煩，需要進行專業的學習。在這里提醒大家，PCR實驗室檢測是要有資質第三方檢測公司檢測，并且提供合格的檢測報告，這樣的實驗室才能起到保護操作人員，樣品的作用!