PCR實驗室為什么要求嚴格分區

2022-05-10 09:47:17

PCR實驗室為什么要求嚴格分區

　　PCR實驗室常見的三個區域是指：

　　1.試劑配制區：PCR反應系統配制區。

　　2.標本處理區：包括擴增模板的制備，即我們經常提取DNA的地方;

　　3.PCR擴增及產品分析區：PCR擴增區，也是擴增產品進行凝膠電泳分析的區域。

　　此外，如果PCR擴增區與產品分析區再次分離，則為四區隔離。

　　四區隔離的主要目的是防止每個PCR區域之間的氣溶膠流動——最好的方法是將每個區域分開一棟建筑，這絕對是最好的隔離措施，但操作絕對不現實，因此有一種方法可以為不同區域設置正負壓：

　　試劑配制區(一區)：最干凈的區域，保持微正壓，使外界空氣無法進入隔離污染源。陰性模板應加入PCR管并蓋，嚴禁在該區域打開。存放帶DNA模板的離心管;

　　DNA模板添加區(二區)：保持微負壓，保證內部空氣不泄漏，避免陽性模板氣溶膠污染外部環境。

　　擴增及PCR產品分析區(三區)：保持微負壓，防止內部空氣泄漏，避免擴增產品氣溶膠污染外部環境。

　　操作時遵循一區→二區→三區單向，不可逆轉。

　　對于用于科研的PCR實驗室，如果不能滿足三區嚴格隔離的要求，至少應隔離兩區：正壓區和負壓區。正壓區實施一區功能，負壓區實施二區、三區功能。

　　最忌諱、最可怕的是在正壓區實施三區功能。關鍵是PCR實驗室不同區域之間的空氣是否相互循環。

　　如果有問題，我們的實驗室沒有正負壓區分，或者全負壓，全正壓怎么辦?然后我們的建議是：不要害怕麻煩，找一個遠離三個區域的實驗室(通常打開PCR擴展產品的蓋子區域，如電泳區)作為PCRI區域，可以節省更多的后續麻煩。

　　由于PCR三區隔離的目的是阻斷氣溶膠的交流，請注意以下細節，思考氣溶膠來自哪里：

　　1.各區域應配備專用移液器，不得交叉混用。

　　2.各區域應配備專用移液器吸頭，不得交叉混用。

　　3.如果條件允許，在PCRII區工作后，需要更換實驗服、一次性鞋套、帽子、手套。

　　4.在PCRI區域。PCRI區備濾芯吸頭。

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